支原体检查抑制的“罗生门”

实验室日常检测中每一个异常结果都会引发一次对真相的追问。近日我们实验室刚刚结束了一起支原体检查抑制事件的调查。这次事件没有人员操作失误没有设备故障没有试剂物料的质量问题也没有环境的交叉污染却让我们实验室和客户一起经历了一场“罗生门”。支原体检查是将样品接种于特定培养基中在适宜的环境下培养一定的时间在仪器下观察是否有支原体生长。但是如果样品中含有能够抑制支原体生长的成分或物质就会导致支原体无法生长从而导致出现假阴性即支原体检查抑制现象。一、异象突现初步调查在义翘神州实验室的一个日常检测中实验员在执行客户某项目的支原体检查测试中发现样品出现明显的检测抑制现象。该项目出现抑制现象时实验员第一时间上报实验室管理人员并按照要求联系客户同步进行一系列的调查。我们对阳性对照组进行了观察发现阳性对照组结果正常。根据以往经验我们第一时间询问了客户“样品中是否添加了抗生素或其他可能抑制支原体生长的物质”客户的回答也非常的肯定“绝对没有添加”。基于对客户的信任我们实验室又对整个实验过程的人、机、料、法、环等要素进行了排查。从人员的操作到物料的使用再到实验环境的监测数据都没有发现明显的实验过程偏差。二、抽丝剥茧成功溯源既然操作和实验试剂都没有问题那问题只能重新聚焦到样品本身了。这次义翘神州实验室团队更换了调查角度。没有再追问客户的样品中添加了什么而是对样品的完整成分清单进行了追溯。我们邀请客户一同参与调查、溯源最终发现样品的培养基体系中含有硫酸卡那霉素。卡那霉素是典型的氨基糖苷类抗菌物质对支原体具有明确的生长抑制作用。卡那霉素能够抑制微生物的蛋白质合成。在本次事件中其浓度虽然不会造成指示细胞的死亡但足以显著抑制支原体的增殖导致支原体指示细胞培养法检测失败。至此真相大白证据链形成完整闭环。客户确实没有“主动添加”任何抑制支原体生长的成分但是在其培养基中存在卡那霉素这一既定配方成分导致样品中存在客观的抑制物质。三、法规研读抑制试验方法适用性的必要性各国药典对支原体检查抑制测试的必要性要求略有差异接下来我们逐一分析。1、欧洲药典EPEP中明确规定了支原体培养法检测必须进行抑制物质试验test for inhibitory substances。2025年发布的EP 12.2版本对该章节进行了近15年来最大规模的修订已于2026年4月1日正式生效· 培养法延续保留抑制物测试为法定验证项目· 抑制物测试针对特定产品须使用送检方自己的产品基质完成专属验证· 若发现抑制性物质主要处理策略是稀释Dilution——但稀释倍数必须在法规允许范围内· 产品的生产工艺变更后需重新进行抑制物测试。2、美国药典USPUSP63中对相关内容也做出了要求· 必须进行支原体抑制试验Mycoplasma stasis Assay确认样品中是否存在抑制物质· 接受标准比EP更严格· 同一工艺下验证只需进行一次但生产方法发生变化可能影响检测结果时需重复检测。3、中国药典通则3301仍以培养法和指示细胞培养法为支原体检查的金标准。对于主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞及临床治疗用细胞应同时采用培养法和指示细胞培养法。四、异常事件的启示本次异常事件对我们的实验室和客户都非常具有警示意义。对实验室而言· 可优化《样品委托书》内容将确认“是否添加抑制物质”改为“检查样品成分清单确认是否含支原体抑制物质”。· 增强客户宣贯通过各种渠道向客户传递方法适用性的必要性和样品确认的必要性。对客户而言· 特殊成分“没加”不等于“没有”。样品中的抑制物可能来自培养基配方、冻存保护剂、辅料等“常规成分”。送检时请完整披露样品的全部成分清单——不仅是“你加的”还包括“配方里有的”。如果出于保密无法提供全部成分清单应送样前内部检查。· 抑制物测试是法定责任不是选择题。EP和USP均明确规定必须针对特定产品基质完成适用性检查。义翘神州生物安全检测实验室义翘神州苏州实验室**硬件设施突破4000平方米配有GMP级别洁净实验室引进先进仪器设备400余台套建立了完善的管理体系已获得CMA、CNAS认证。实验室提供专业、高效、优质的细胞库检测和病毒清除验证服务满足中外双报需求涵盖重组表达的抗体、蛋白、疫苗及细胞和基因治疗等产品为临床前研究、新药临床试验申请IND、新药上市申请NDA等生物制药行业全产业链提供服务。